ISOLASI MIKROBA

ISOLASI MIKROBA

ISOLASI ? Apa itu ?

  Isolasi mikroba adalah proses memindahkan kultur murni mikroba  dari mediumnya  ke medium buatan dengan tujuan untuk menumbuhkan dan mengembangbiakan serta peremajaan mikroba tersebut. Adapun alat umum yang digunakan untuk memindahkan kultur murni berupa ose tusuk dan ose bundar.

MIKROBA Apa?

Mikroba berupa bakteri asam laktat atau Lactobacillus  casei. Lactobacillus  casei memiliki morfologi koloni berwarna putih pucat dan  sedikit transparan. Bakteri ini termasuk ke dalam bakteri gram positif, berbentuk batang pendek dan tergolong bakteri anaerob fakultatif. Metabolit utamanya adalah asam laktat.

CARANYA ?

a. Pembuatan Media Plate Count Agar (PCA) dan Nutrient Agar (NA)

b. Sterilisasi Alat secara Fisik 

c. Sterilisasi Alat secara Kimia

d. Pembuatan Larutan Fisiologis

e. Pengenceran Bertingkat

f. Inokulasi Mikroba Metode Pour Plate

g. Inokulasi Mikroba Metode Spread Plate

h. Isolasi Mikroba pada Cawan Petri

i. Isolasi Mikroba pada Agar Miring dan Agar Tegak

            

METODE ??

a. Metode Pengoresan:

1. Metode Zigzag; cara memindahkan mikroba meggunakan teknik penggoresan menggunakan ose bundar. Penggoresan ini dilakukan pada permukaan media. Tempat tumbuh mikroba mengikuti pola garis zig-zag yang dibuat, dimana mikroba yang tumbuh paling banyak terdapat pada ujung goresan, awal ose bundar tersebut. 

2. Metode Persegi; penggoresan membentuk persegi yang garisnya tidak boleh terputus menggunakan ose bundar. Fungsi metode tersebut ialah untuk mengetahui jumlah mikroba yang tumbuh. Tempat penggoresan pertama pada permukaan media merupakan tempat yang paling banyak tumbuh mikroba. 

b. Media yang digunakan:

1. Agar Miring; Media agar dilakukan dengan cara memiringkan tabung reaksi  hingga mencapai kemiringan tertentu segera setelah media NA dituang masuk kedalam tabung reaksi. Agar miring menggunakan teknik penggoresan zig – zag yang memiliki kelebihan pada luas permukaan yang membuat peluang kontaminasi rendah dan dapat mempemperluas bidang untuk indukan murni. Agar miring digunakan untuk mengisolasi mikroba yang bersifat aerob.

2. Agar Tegak; Media agar yang telah dituang masuk ke dalam tabung reaksi diposisikan secara tegak segera. Agar tegak mengisolasi mikroba pada media dengan cara ditusuk masuk hingga mencapai tusukan setengah dari media agar menggunakan ose tusuk. Proses pada media agar tegak biasanya digunakan untuk mengisolasi mikroba anaerob. 

KENAMPAKAN ?
Tabel 06. Kenampakan pada Media Agar dalam Tabung Reaksi

 Tabel 07. Kenampakan pada Media Agar dalam Tabung Reaksi

TAU KAH ANDA ?

1 Media PCA

PCA dibuat dengan melarutkan semua bahan (casein enzymic hydrolisate, yeast extract, dextrose, agar) hingga membentuk suspensi 22,5 g/l, kemudian disterilisasi pada autoklaf (15 menit pada suhu 121⁰C 1 atm). Media PCA ini baik untuk mengetahui pertumbuhan total mikroba (semua jenis mikroba). PCA di dalamnya mengandung komposisi casein enzymic hydrolisate yang menyediakan asam amino dan substansi nitrogen kompleks lainnya serta ekstrak yeast mensuplai vitamin B kompleks. PCA merupakan suatu medium yang mengandung 0,5% tripton, 0,25% ekstrak khamir, dan o,1% glukosa sehingga semua mikroba termasuk bakteri, kapang, dan khamir dapat tumbuh dengan baik pada medium tersebut.

2 Media NA

Media NA adalah medium umum digunakan dalam prosedur bakteriologi seperti uji biasa dari air, produk pangan, untuk membawa stok kultur, untuk pertumbuhan sampel pada uji bakteri, dan untuk mengisolasi organisme dalam kultur murni. NA  digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selektif. Pembuatan medium Nutrien Agar (NA) menggunakan bahan utama beef ekstrak 5 g, pepton 3 g dan agar 3 g. Nutrient Agar adalah suatu medium yang mengandung sumber nitrogen dalam jumlah cukup yaitu 0,3 % ekstrak sapid dan o,5% pepton, tetapi tidak mengandung sumber karbohidrat.

3 Pengenceran Bertingkat

Pengenceran bertingkat bertujuan untuk mengurangi kepadatan mikroba yang ditanam serta memperkecil dan mengurangi jumlah mikroba yang tersuspensi dalam pengenceran. Penentuan besarnya atau banyaknya tingkat pengenceran tergantung kepada perkiraan jumlah mikroba dalam sampel. digunakan perbandingan 1:9 untuk sampel dan pengenceran pertama dan selanjutnya, sehingga pengenceran berikutnya mengandung 1/10 sel mikroorganisme dari pengenceran sebelumnya.

4 Larutan Fisiologis

            Larutan fisiologis berupa larutan NaCl yang telah disterilkan dan digunakan sebagai larutan pengencer mikroba. Larutan fisiologi berfungsi untuk menjaga pH dan tekanan osmotik mikroba. Mikroba sangat peka terhadap perubahan pH sehingga larutan fisiologis berupa NaCl dipakai agar tidak memengaruhi pH mikroba tersebut. 

JADI ?
Berdasarkan hal tersebut dapat diketahui bahwa :

1. Jenis isolasi mikroba yaitu penggoresan metode zig-zag dan metode persegi, serta metode ditusuk.

2. Fungsi agar tegak yaitu untuk mengisolasi mikroba yang dapat hidup dengan adanya udara yang sedikit atau anaerob fakultatif sedangkan agar miring untuk mengisolasi mikropba yang memerlukan udara untuk hidup atau aerob.

3. Ose bundar digunakan untuk mengisolasi mikroba dengan cara digores sedangkan untuk ose tusuk digunakan untuk mengisolasi mikroba dengan cara ditusuk.

thanks to:

Afrianto, L. 2004. Menghitung Mikroba Pada Bahan Makanan, Cakrawala (Suplemen Pikiran Rakyat Untuk Iptek). ITB : Bandung.

Hafsan, M.M. 2015. Penuntun Praktikum Mikrobiologi. Makassar : Universitas Islam Negeri Alauddin.

Irianto, K.2006. Mikrobiologi Menguak Dunia Mikroorganisme. I.Yrama Widya : Bandung.

Legowo, S., Mulyani, A.M., dan Mahananni, A.A. 2008. Viabilitas Bakteri Asam Laktat, Keasaman dan Waktu Pelelehan Es Krim Probiotik Menggunakan Starter Lactobacillus casei dan Bifidobacerium bifidum. J Indo Trop Anim Agri. 33(2) : hal. 120-125.

Shah NP. 2007. Functional culture and health benefits. International Dairy Journal 17: 1262 – 1277.

Wasteson, Y, and Homes, E. 2009. Pathogenic Escherichia Coli Found in Food. International Journal Of  Food Microbiology. 12, 103-114.

Widodo. 2014. Mikroibiologi Edisi 2. Tangerang Selatan : Universitas Terbuka.